أمثلة طرائق استخلاص ‏RNAمن صنف الزبتون ‏Danالمحلّي المُعمّر ‏Dan Europaea. Var.ا ‏europaea Oleaبهدف الكشف عن تعبير مورّثات مقاومة الجفاف

Abstract

.بعد الجفاف من أخطر المشكلات العالمية التي تهدد الإنتاج الزراعي لا سيما في منطقة الشرق الأوسط، ضلفت بعض النباتات على أنها متحملة للجفاف حيث تبدي تكيفاً مع ظروف الجفاف بطرائق مختلفة تعود جميعها الأساس وراثي حيث تتحكم موزنات تحمل الجفاف وعبر آليات متنوعة باستجابة النبات لهذا الإجهاد اللاإحيائي. ومن أهم النباتات التي خلفت على أنها مقاومة للجفاف هو الزيتون. ركزت هذه الدراسة على تقييم إستجابة صنف الزيتون المحلي المعمر دان Olea europaea L Var Europaea Dan الإجهاد الجفاف، وذلك بدراسة عينات من نفس صنف الزيتون مأخوذة من منطقتين مختلفتين بينياً ضمن شروط الحفل الطبيعية منطقة خوط (السويداء منطقة جافة، ومنطقة أمبيا (غرب دمشق) منطقة رطبة في سورية جمعت 27 عينة من فروع أشجار الزيتون من كل حفل ليكون المجموع الكلي العينات الدراسة 54 عينة جرى تقييم الاختلافات لبعض الصفات المورفولوجية والحيوية كطول الفروع المساحة الورقية المحتوى النسبي للماء ونسبة المادة الجافة، كما فيس تركيز البرولين في الأوراق، ثم جرت أمثلة ومقارنة الفعالية عدة طرائق استخلاص RNA من أوراق الزيتون في كلتا المنطقتين لأن الحصول على RNA عالي النقاوة وتركيز كبير هو الخطوة الأساس والأهم في ضمان نجاح الدراسات اللاحقة للتعبير المورثي لا سيما من النباتات الشجرية استخلص RNA من ثلاثة مكررات (أشجار) من كل حفل اعتماداً على ثلاث طرائق استخلاص الأولى طريقة العنيدة التجارية (Qiagen)، الثانية التقليدية باستعمال CTAB، والثالثة التي قمنا بأمثلتها بالاعتماد على CTAB وجرى تعديل شروط التثقيل، واستعمال مادة خلات الصوديوم إضافة إلى كلوريد الليثيوم واختصار زمن ترسيب RNA إلى 30 دقيقة. قيمت فعالية الطرائق الثلاث بقياس درجة نقاوة وتركيز RNA المستخلص باستعمال جهاز المطياف الضوئي Spectrophotometer على أطوال الموجات ( 230 260m, 280 nm ) والتأكد من سلامة الحمض النووي المستخلص بترحيل العينات على علامة الأغاروز 1.5% باستعمال الرحلان الكهربائي جرى بعد ذلك اصطناع السلسلة الأولى DNA المتمم.DNA) من RNA الكلي المستخلص كخطوة أولى للحصول على السلسلة المضاعفة من DNA وتخزينه بهدف الكشف عن مورثات الجفاف في الزيتون لاحقاً. بينت النتائج أن الزيتون المعرض للجفاف أبدى فروقاً معنوية في الصفات المدروسة عن نفس الصنف المزروع في بيئة رطبة، كان متوسط طول الفروع الثمرية ومتوسط المساحة الورقية في أشجار منطقة أمبيا ( 161.33 138.91 على cm 38.78cm( على الترتيب أعلى معنوياً منه في أشجار منطقة حوط cm 51.48cm الترتيب). لم تظهر النتائج فروقاً معنوية بالنسبة المتوسط نسبة المادة الجافة للأوراق في كلتا المنطقتين، في حين كان متوسط محتوى الماء النسبي للأوراق (76.88%) في أشجار منطقة أمبيا أعلى معنوياً منها في أشجار منطقة حوط (66634) تراجعت المساحة الورقية تحت ظروف الجفاف مع الإبقاء على كفاءة التركيب الضوئي في اصطناع المادة الحية. كان متوسط محتوى الأوراق من البرولين في أشجار منطقة حوط (0.52) (mg/g (W أعلى معنوياً منها في أشجار منطقة أمبيا ( 0.34 بالنتيجة، انخفاض محتوى الماء النسبي تحت ظروف الجفاف لدى أوراق الصنف دان قابلته زيادة كمية المركبات المعدلة حلولياً كالبرولين وذلك للحفاظ على التوازن الأمثل في العلاقات المائية للخلايا الحية. أظهرت نتائج قياس تركيز ونقاوة RNA الكلي أن جميع الطرائق المطبقة في دراستنا كانت فعالة لاستعمال RNA الأهداف دراسة التعبير الموزلي لاحقاً، جميعها بينت قيم نقاوة عالية تراوحت بين (18-2.0)، إلا أن الطريقة المعدلة كانت الأفضل من حيث التركيز الأعلى من RNA الكلي (12-1pg/ml 784 واختصار زمن الاستخلاص الذي استغرق 4 ساعات فقط في يوم واحد، يليها طريقة CTAB الأساسية فقد كان التركيز حالياً أيضاً 17.41 (752) لكلها استغرقت زمناً أطول (20) ساعة) على مدار يومين، أما طريقة العديدة فقد كانت الأقل تركيزاً (14.5 (500) والأقصر زمناً (3) ساعات). الكلمات المفتاحية الجفاف الزيتون الصنف دان استخلاص RNA التعبير المورثي تاسعاامثلة طريق استخلاص RNA من صنف الزيتون بان المحلي المعتر التركماني