دراسة التفكيك الحيوي لصادات البيتا لاكتام في العينات المائية باستعمال البيتا لاكتاماز المنتجة بفعل الجراثيم

Abstract

تستأثر مياه الصرف غير المعالجة بأهمية كبيرة بسبب خطرها على البيئة والصحة مما يستدعي معالجتها، وقد هدفت الدراسة الحالية التي تمت على مستشفيات جامعة دمشق الوطني الجامعي والأطفال والمواساة والتوليد) إلى تقييم بعض الصفات الكيميائية لمياه الصرف الصحي للمستشفيات التي تمت الدراسة فيها وتحديد الأجناس الجرثومية الأكثر انتشاراً في مياهها، إضافة إلى تقييم وجود E.coli المقاومة الصادات البيت الاكتام وتحديد نسبة العزلات المنتجة لأنزيم البيت الاكتاماز في مياه الصرف الصحي لهذه المستشفيات، وقد بينت النتائج ارتفاع قيم pH وكمية المواد المنحلة TDS والناقلية الكهربائية والتعداد العام للجراثيم والإمعائيات عن المستويات العالمية، وكان أعلاها قيمة مشفى المواساة وأقلها المشفى الوطني الجامعي وكانت أقل أعداد الجراثيم النامية على الآغار المغذي ووسط EMB في المستشفى الوطني الجامعي وأعلاها في مستشفى المواساة أثبتت نتائج اختبار One Way Anova وجود فروق معنوية بين متوسطات أعداد الجراثيم النامية على وسطي الآغار المغذي العادي ووسط EMB للمستشفيات الأربعة بمستوى ثقة 95%، وتعود الجراثيم التي وجدت في مياه الصرف الصحي إلى الأجناس Enterobacter و Pseudomonas التي شكلت الغالبية العظمى و Klebsiella التي كانت بنسبة أقل و Proteus و E.coli وأقلها تواجداً النوع Staphylococcus aureus وعزلت 150 عزلة من E.coli من مياه الصرف الصحي للمستشفيات السابقة، أجريت عليها اختبارات الحساسية على عدد من صادات البيت الاكتام، وقد بلغت نسبة المقاومة %100 السيفالوسبورينات الجيل الأول و 86% لسيفالوسبورينات الجيل الثاني وتراوحت بين 78% و 100 % السيفالوسبورينات الجيل الثالث، أما نسبة المقاومة تجاه (Amoxyllin (AMX من البنسيلينات فبلغت 93%، وقد تحمل 52% من العزلات التراكيز العالية من (Ceftriaxone (CTR وصلت إلى 500 g/ml، وكانت 88% من العزلات المقاومة منتجة لإنزيم البيتا لاكتاماز الذي يعود إلى الصف Class A. وقد بينت النتائج أن استخلاص البلازميدات بطريقة العلي كانت الطريقة الفضلى مقارنة بالطريقة القلوية. وأجريت عملية تحييد للبلازميدات للتأكد من كون الصفة محمولة على البلازميدات بطريقتين الأولى بإضافة مركب SDS عند استزراع الخلايا والطريقة الثانية برفع درجة حرارة الحضن إلى 42 مع إعادة الاستزراع 8-10 مرات التي كانت الطريقة الأفضل لتحييد معظم البلازميدات في العزلات قيد الدراسة، وكانت البيت الاكتاماز واسعة الطيف (ESBLS) المنتجة من الصف A هي الأكثر تواتراً ضمن هذه الدراسة لاسيما تلك التي تعود إلى المجموعة bla CTX وذلك عند استعمال مجموعتين من المرئسات تنتميان إلى تمطين مختلفين (bla CTX و bla SHV) وانتخبت العزلة 29 E لكونها تحمل المورثة المسؤولة عن إنتاج البيتا لاكتاماز من النوع hla CTX الدراسة فعالية الخلاصة الخام للبيتا لاكتاماز والبيتا لاكتمار المنقى. وقد بدأ إنتاج البيتا لاكتاماز عند الساعة الثالثة من الطور اللوغاريتمي للنمو في درجة الحرارة 37 ) وبلغ أعلى إنتاج له عند الساعة الخامسة من الطور اللوغاريتمي، وأجريت عملية التنقية الجزئية للإنزيم على عمود Sephadex G100 بسرعة جريان أمل بالدقيقة، وأعطت الأجزاء (91-96) فعالية إنزيمية واضحة، وبينت النتائج أنه يمكن استعمال الإنزيم المنقى لتفكيك Cefteriaxon في مياه صرف المستشفيات. الكلمات المفتاحية بيتا لاكتام، TDS سيفالوسبورينات البيت الاكتاماز، تحييد البلازميد، مياه الصرف الصحي للمستشفيات ESBLS