الكشف عن غش الحليب وتلوثه الميكروبي باستخدام التقانات الحيويةو استنباط طرائق أكثر كفاءة لحفظ الحليب

Abstract

بعد الحليب أحد المصادر المهمة والغنية بالكثير من المغذيات مما يجعله عرضة للتلوث الجرثومي الذي يسبب حالات كثيرة من التسممات الغذائية، ونظراً إلى خطورة هذه التسممات على صحة الإنسان والحيوانات لابد من القيام بالتشخيص المباشر لهذه العوامل الممرضة في الحليب. بعد غش الحليب مصدر قلق دائم ويسبب مخاطر صحية خطيرة باستمرار وقد تؤدي إلى أمراض معينة حيث كثيراً ما يستبدل حليب الأغنام والماعز بحليب الأبقار، بسبب وفرة حليب الأبقار وقلة تكلفته، وبما أن الجودة والسلامة هي من المتطلبات الأساسية الواجب توافرها في الحليب الخام، ومنتجاته، كان لابد من إيجاد طريقة ذات حساسية وخصوصية عالية للكشف عن عش الحليب. جمعت 100 عينة من الحليب العام الأبقار والأغنام والماعز إضافة إلى مسحوق الحليب المجفف. اعتمدت المرحلة الأولى على عزل الجراثيم الممرضة من خلال زرعها على أوساط اصطفانية ليتم بعدها إجراء بعض الاختبارات الحيوية الكيميائية النوعية على المستعمرات النموذجية، ونظراً إلى إمكان الحصول على نتائج إيجابية أو سلبية كاذبة كان إجراء التفاعل السلسلي للبوليميراز PCR لهما كطريقة تأكيدية لتحديد هذه الأنواع الجرثومية كانت جراثيم العنقودية الذهبية أكثر الجراثيم المعزولة حيث بلغت نسبتها 31% فيما سجلت الإشريكية القولونية أعلى نسبة عزل بين الأمعانيات حيث بلغت نسبتها 21% وأقل نسبة سجلتها السالمونيلا 6% بينما كانت نسبة عزل الكلبسيلة 26% كما تم عزل البروسيلا وبلغت نسبتها 3% وعزل الزائفة الزنجارية بنسبة 5% وعزل الليستيريا وبلغت نسبتها 13%..تم عدوى الحليب تجريبياً ببعض الجراثيم الممرضة، وعزل DNA الجرثومي من الحليب مباشرة وإجراء تفاعل PCR عليه كشفت الدراسة كفاءة في استخلاص DNA الجرثومي مباشرة من الحليب الخام، كما أكدت أن تقانة PCR ذات حساسية ونوعية عالية في التشخيص المباشر للجراثيم الممرضة في الحليب، حيث أظهرت النتائج القدرة على الكشف عن الجراثيم حتى التركيز CFU/ml 110 ضمن شروط الدراسة؛ مما يسمح باستعمال PCR للفحص الوقائي في الكشف عن العوامل الممرضة في الحليب. طبقت تقنية PCR لتمييز الأنواع المختلفة من الحليب الخام باستعمال شفع من المرنسات النوعية. والمصممة المورثة السيتوكروم من الجسيمات الميتاكوندرية الخاصة للأبقار والأغنام والماعز حيث كانت ملول العصابات 365bp للأبقار، 275hp للأغنام 400bp للماعز، ووصلت حساسية الكشف حتى 0.75%، وبالتالي تطوير طريقة سريعة ذات حساسية، ودقة عالية للكشف عن حليب الأبقار المضاف إلى حليب الماعز أو حليب الأغنام بهدف الغش، وبالتالي يمكن استخدامها على نطاق واسع في التحاليل الجزيئية. يواجه المنتجون العديد من المعوقات في تبريد وتخزين ونقل الحليب الخام بسبب نقص المعدات وصعوبة التحكم في شروط التخزين المناسبة، مما ينعكس على جودة الحليب الخام وفساده قبل وصوله إلى المستهلكين لذا أجريت دراسة فعالية طريقة اللاكتوبيروكسيداز LPS) Lactoperoxidase) ودراسة تأثيره في الجراثيم الممرضة الموجودة في الحليب بهدف إطالة مدة حفظ الحليب عن طريق تنشيطه بإضافة مادة تيوسيانات الصوديوم NSCN وبيركربونات الصوديوم NaCO3:0 مدة 5 ساعات والحضن عند الدرجة 37 هم ، وإجراء اختبارات الجودة الصحية كالحموضة والغليان والتخثر إضافة إلى التعداد الكلي للجراثيم.أظهرت النتائج وجود اختلافات واضحة بين العينات المعاملة والشاهد من حيث تأثير تركيز طريقة LPS في الحفاظ على فترة صلاحية الحليب حيث بقي الحليب محافظة على جودته مدة خمس ساعات وخفض المحتوى الجرثومي لكل من العنقودية الذهبية Staphylococcus aureus والإشريكية القولونية Ecoli يشكل حفظ الأغذية حالة سباق بين الإنسان والجراثيم فالإنسان يحاول حفظ الغذاء والجراثيم تحاول أن تتلفه، وبما أن الحليب غني المواد الغذائية مما يشجع على نمو الجراثيم فيه وافساده لذلك درست فعالية العصيات اللبنية Lactobacillus في حفظ الحليب المعزولة من الحليب الخام، والشكل الظاهري والخصائص الحيوية ثم كان اختبار Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus الكيميائية لهذه السلالات وتبين أنها تتبع فعالية رشاحة العزلات على تثبيط نمو الجراثيم الممرضة للإنسان كالعنقودية الذهبية والسالمونيلة التيفية Salmonella typhi واختبار حفظ الحليب الخام من خلال هذه الرشاحات أظهرت نتائج هذه الدراسة مقدرة سلالة L delbrueckii على تثبيط نمو العنقودية الذهبية والسالمونيلة التيفية في الحليب العام عند حفظه في الدرجة 4 م لكنها لم تتمكن من تتبيطها في الدرجة 37م. بينما تم تثبيط الجراثيم المذكورة أعلاه في المرق المغذي في كلا الدرجتين 37 م و 4 م. الكلمات المفتاحية على الحليب الجراثيم الممرضة، التفاعل السلسلي للبولميراز، اللاكتوبيركوسيداز. العصيات اللبنية.