تطوير طرائق الإكثار الخضري الدقيق وحفظ الأصول الوراثية لبعض أنواع السوسن البري في سورية

Abstract

الملخص لقد هذا البحث في مخابر الهيئة العامة للتقانة الحيوية، وفي مخابر كلية الزراعة خلال الفترة 2013 حتى 2017 - تم في هذا البحث وضع بروتوكول لحفظ السوسن الأسود والذهبي بوساطة لقانات زراعة الأنسجة النباتية، ودرست بعض العوامل المؤثرة في ذلك، كما ثم تخفيف النمو و زيادة الفترة الزمنية بين عمليات النقل باستخدام مجانين من درجة الحرارة (3) و 23 م )، وأربعة تراكيز من المحلول المعدني ( كامل 1/2 ، 1/5 ، 1/10)، كما تم إضافة ثلاثة محاليل اسموزية السكروز، والسوربيتول والمانيتول) بثلاثة تراكيز مختلفة لكل منهما (10) و 20 و 30 غال)، بالإضافة إلى استخدام تراكيز مختلفة من حمض الأبسيسيك (0.5 1 2 3 معال) باستخدام القسم النامية دون إضافة منظمات النمو. بينت النتائج أن أعلى قيمة لنسبة البقاء (75%) والمتوسط عدد النموات (21) تم الحصول عليها عند استخدام التركيز 20 عال من السكروز في السوسن الأسود، أما في السوسن الذهبي فقد تم الحصول على أفضل نسبة بقاء (60.41%) وأفضل متوسط العدد النموات (4.07) في الوسط المضاف له 10 إلى سوربيتول بعد مرور ثلاثة اشهر، كما توضح النتائج أن أعلى نسبة بقاء (%86.66) تم الحصول عليها عند استخدام المحلول المعدني بنصف تركيزه في السوسن الأسود وبفروق معنوية مع المحلول الممدد لعشر تركيزه (54.44%)، أما في السوسن الذهبي تم الحصول على افضل نسبة بقاء (80%) في المحلول الممدد عشر مرات وبفروق معنوية مع الوسط MS بكامل تركيزه (48.89%) وقد سجل الدور الإيجابي لدرجات الحرارة المنخفضة (3) م حيث أعطت أفضل نسبة للبقاء (90%80% في السوس الأسود والذهبي على التوالي ). وخفضت من نمو العينات النباتية، وأطالت الفترة الزمنية بين عمليات النقل حتى 6 أشهر. أما بالنسبة لحمض الابسيسيك بينت النتائج أن التركيز 2 مغال أعطى أعلى نسبة بقاء (84%) وبفروق معنوية مع الشاهد في حين أعطى التركيز 0.5 مع إلى أعلى معدل إكثار (1.85) وبفروق معنوية مع الشاهد أيضاء أما بالنسبة لاستطالة الأفرع فقد أعطى الشاهد أعلى قيمة لها (1.12) سم)، في حين توضح النتائج موت جميع النباتات المحفوظة بدرجة حرارة 23م بعد مرور 12 شهرا. كما تم في هذا البحث وضع تقانة لحفظ السوسن الأسود والذهبي بالتجميد لأول مرة في سورية بواسطة تقنية التزجج والكبسلة بالنسبة لتقانة التزجج تم أخذ القسم النامية بطول 3 مم ومن ثم زرعت في وسط الزراعة الأولية: موراشيج وسكوج (MS) صلب ومضافا له 0.3 مول سكروز المدة ثلاثة أيام في الظلام وفي درجة حرارة 124 درست بعض العوامل المؤثرة في التزجج مثل تركيز محلول الترجج (VS2) (%100 لمدة 20 دقيقة، 60% لمدة 10 دقائق ثم 100% لمدة 10 دقائق كما استخدم زيادة تدريجية منه 20 40 60 ثم 100% مدة 5 دقائق لكل تركيز)، وتأثير نوع محلول التحميل إما سكروز بتركيز | مول، أو سكروز بتركيز 0.4 مول -2 مول غليسيرول، أو مزيج مركب من السكروز (0.5) (مول) و DMSO (5) أو (10%) لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة 25م، وأيضا تأثير مدة التعرض لمحلول التحميل ( 150 30 45 60) دقيقة) في درجة حرارة 25 أوضحت النتائج أن استخدام أربعة تراكيز متتالية من محلول 2 ( 04020 ، و (100%) بالتدريج لمدة خمس دقائق أعطى أعلى نسبة حيوية بالنسبة النموات السوسن الأسود والذهبي المحفوظة (39) (30%)، وغير المحفوظة (75%، 50%) بالتجميد على التوالي، كما دلت النتائج أن أعلى نسبة للحيوية تم الحصول عليها 90% بالنسبة للقسم النامية غير المحفوظة بالتجميد النبات السوسن الأسود لدى استخدام محلول التحميل المؤلف من (0.5) مول سكروز + 10 DMSO) بينما تم الحصول على نسبة حيوية 30% بالنسبة القمم النامية المحفوظة أما في تقنية الكسلة التحفيف ثم أخذ القسم النامية من النباتات المزروعة مخبريا، وزرعت في وسط الزراعة الأولية السابق ذكره لمدة ثلاثة أيام عمرت القمم النامية في وسط MS سائل خال من الهرمونات والكالسيوم ويحوي 3% الجينات الصوديوم 0.3 مول سكروز لمدة 20 دقيقة. بعد ذلك تم أخذ القسم النامية بشكل منفرد باستخدام ماصة معقمة مع 200 ميكروليتر من محلول الجينات الصوديوم وغمرت في وسط MS سائل خال من الهرمونات مضاف له 100 ميلي مول كلوريد الكالسيوم 0.3 مول سكروز وذلك لتشكيل كبسولات (Beads) وتركت لمدة 30 دقيقةمع التحريك المستمر - بينت النتائج التي حصلنا عليها أن محتوى الماء في الكبسولات قد تناقص من 78% إلى 23 و 17% بعد 4 و 6 ساعات من التجفيف على التوالي. وخلال تقنية الكبسلة التجفيف تم دراسة تأثير مدة التجفيف (420، 6 ساعات وتراكيز السكروز (0) 0.5 10.75 مول، ومعدل التبريد تجميد سريع من خلال غمرها مباشرة بالأروت السائل، أو تجميد بطيء 20 ثم 80 ثم غمرها بالازوت السائل.)، بالاضافة الى تأثير عملية الأقلمة على حرارة 1م لفترات زمنية مختلفة (0) 2، 4، 8، 10 أسابيع). بالنسبة للتفاعل ما بين تركيز السكروز وفترة التجفيف تم الحصول على أفضل نسبة للحيوية %67 لدى استخدام تركيز 0.75 مول سكروز و 4 ساعات تجفيف وبفروق معنوية مع باقي المعاملات توضح نتائجنا زيادة في نسبة الحيوية من 67% للقسم النامية غير المؤقلمة إلى 77% بعد 4 أسابيع من الأقلمة الباردة، كما ارتفعت الى 82% بعد 8 أسابيع وبفروق معنوية بالمقارنة مع القمم غير المؤقلمة، وأيضا ازدادت نسبة اعادة النمو من 0% من دون عملية أقلمة إلى 25% ثم إلى 27% في الأسبوع الثاني والرابع على التوالي، كما تم الحصول على أفضل نسبة لاعادة النمو 39% بعد الأسبوع الثامن من عملية الأقلمة وبفروق معنوية مع الشاهد دون أقلمة. كما أثر معدل التبريد أيضا في نسبة اعادة النمو وبفروق معنوية حيث تفوقت النموات المجمدة بشكل سريع والتي أعطت %39% على النموات المجمدة بشكل بطيء والتي أعطت 23.33%. وأخيرا تم دراسة الثبات الوراثي في النباتات المتجددة بعد الحفظ بالكبسلة وبحمض الأبسيسيك مع النباتات الأم باستخدام تقنية الـ ISSR باستخدام 22 بادئ وقد كانت نسبة التشابه الوراثي عالية (%99-95) مما يدل على عدم حدوث أي تباين وراثي في النباتات المحفوظة بالكبسلة وحمض الابسيسيك مع النباتات الأم ..