تأثير فيتامين B12 والليبوبروتينات منخفضة الكثافة LDL في مؤشرات السائل المنوي المجمد وقدرته الإخصابية عند الماعز الشامي

Abstract

هدفت هذه الدراسة إلى تحديد التركيز الأمثل من فيتامين B12 ومن جزيئات الليبوبروتينات منخفضة الكثافة (LDL) المستخلصة من صفار البيض لاستخدامهما إما بصورة إفرادية أو تأزرية في محاليل تمديد السائل المنوي للماعز الشامي، وتقدير فعاليتهما في حفظ السائل المنوي الممدد والمجمد الذكور الماعز الشامي وتحديد قدرته الإخصابية. نفذت هذه الدراسة على ثلاث تجارب في محطة بحوث إزرع التابعة للمركز العربي لدراسات المناطق الجافة والأراضي القاحلة (أكساد) خلال الفترة الممتدة من 2017-2018 جميع السائل المنوي بوساطة المهبل الصنعي من 10 ذكور من الماعز الشامي بمتوسط عمر 736 أشهر ومتوسط وزن 375 كغ مخصصة كطلائق تلقيح صنعي وبمعدل مرتين أسبوعياً من كل ذكر خلال الموسم التناسلي. تضمنت التجربة الأولى ثلاث مراحل، اختبر في المرحلة الأولى من هذه التجربة التركيز الأمثل من جزيئات LDL المستخلصة محلياً والمستخدمة بتركيز 6، 8، 10% بديلاً لصفار البيض الكامل، في حين اختبر في المرحلتين الثانية والثالثة التركيز الأمثل من فيتامين B12 المضاف بأربعة تراكيز (1، 2، 3 4 ملغ مل إلى محلول التمديد المحلي EYC) Egg yolk Citrate)، ومحلول التمديد المحتوي على %8 من جزيئات LDL. استخدم محلول الأندروميد المستورد كشاهد تجاري في جميع مراحل هذه التجربة. في التجربة الثانية، اختبر تأثير حجم القشة المستخدمة في تعبئة وتجميد السائل المنوي الذكور الماعز الشامي والممدد في ثلاثة محاليل تمديد منتخبة من التجربة الأولى (الأندروميد، ومحلول EYC ومحلول التمديد المحتوي على %8% من جزيئات LDL المضاف إلى كل منهما 2 ملغ مل من فيتامين (B12) والتي عينت في حجمين من القشات (0.5 0.25 مل) والمحتوية على تركيز موحد من النطف والمجمدة بنفس منحى التجميد. استخدم نظام CASA لتقييم مؤشرات حركة وسرعة النطف حاسوبياً، وقيمت حيوية وسلامة الغشاء البلازمي وسلامة DNA للنطف بعد الإذابة، كما قدر مستوى فوق أكسيد الهيدروجين في محاليل التمديد للمرحلتين الثانية والثالثة من التجربة الأولى لتحديد الدور الحيوي لفيتامين B12. في التجربة الثالثة، وزعت الإناث المخصصة للتلقيح الصنعي إلى ثلاث مجموعات تجريبية، حيث تم توقيت شبق الإناث هرمونياً ولقحت صنعياً في عنق الرحم بأفضل ثلاثة محاليل تمديد منتخبة من التجربتينالأولى والثانية. أطلقت الذكور الكشافة لكشف الإناث المرتدة للشبق، واستخدم جهاز الإيكوغرافي لتحديد نسبة الإناث الحوامل. خضعت نتائج التجربتين الأولى والثانية للتحليل الإحصائي باستخدام برنامج التحليل الإحصائي SPSS. اختبرت معنوية الفروق بين النسب المئوية للقدرة الإخصابية وفق اختبار فيشر (F) الخاص باختبار معنوية الفروق بين النسب المئوية. أظهرت نتائج مؤشرات حركة النطف بعد التجميد والإذابة باستخدام جهاز Computer Assisted CASA) Semen Analysis) للمرحلة الأولى من التجربة الأولى أن محلول التمديد 8% LDL أظهر تفوق معنوياً (P < 0.05) بالمقارنة مع بقية محاليل التمديد المدروسة في مؤشرات الحركة العامة وحيوية وسلامة الغشاء البلازمي للنطف (68.90 ، 69.95 ، 67.80% على التوالي)، في حين لوحظ تفوق معنوي (P < 0.05) لمحلول التمديد التجاري على بقية المحاليل الاختبارية في مؤشر الحركة التقدمية (%14.50) وكذلك في مؤشرات سرعة النطف (ALH) VSL VCL VAP) والتي بلغت قيمها (93.46) ميكرومتر / ثانية 62.43 ميكرومتر / ثانية، 170.63 ميكرومتر / ثانية، 8.14 ميكرومتر على التوالي. أظهرت نتائج التحليل الإحصائي للمرحلة الثانية من التجربة الأولى أن إضافة فيتامين B12 بتركيز 2 ملغ من المحلول التمديد المحلي أدى إلى زيادة معنوية (P < 0.05) في مؤشرات الحركة العامة وحيوية وسلامة الغشاء البلازمي للنطف مقارنة ببقية محاليل التمديد المدروسة (69.80%، 71.30%، 70.10%، على التوالي). لوحظ تفوق معنوي (P < 0.05) لمحلولي التمديد التجاري ومحلول التمديد المحتوي على 2 ملغ /مل من فيتامين B12 في مؤشر الحركة التقدمية بعد عمليتي التجميد والإذابة (14.40%، 14.90%، على التوالي). كما تفوق معنوياً محلول التمديد التجاري (P < 0.05) في معظم مؤشرات سرعة النطف على بقية محاليل التمديد المدروسة. كما تبين نتيجة التحليل الإحصائي الاختبار قياس مستوى فوق أكسيد الهيدروجين HO2 لمحاليل تمديد السائل المنوي المدروسة أن إضافة فيتامين B12 كان له دور هام ومعنوي (P < 0.05) في خفض مستوى فوق أكسيد الهيدروجين مع زيادة تركيز فيتامين B12 في محاليل التمديد الاختبارية. أكدت نتائج مؤشرات حركة النطف باستخدام جهاز CASA للمرحلة الثالثة من التجربة الأولى أن إضافة فيتامين B12 إلى محلول التمديد المحتوي على %8 LDL بتركيز 2 ملغ / مل تفوق وبشكل معنوي (0.05) في مؤشرات الحركة العامة وحيوية وسلامة الغشاء البلازمي للنطف بعد عمليتي التجميدوالإذابة على بقية محاليل التمديد المدروسة (73.90، 76.80% 76.20%، على التوالي). في حين تفوق وبشكل معنوي (P < 0.05) محلول التمديد الشاهد التجاري والمحلول الاختباري المحتوي على 2 ملغ مل من فيتامين B12 على بقية محاليل التمديد في مؤشر الحركة التقدمية وبلغت نسبة الحركة التقدمية 14.60%، 14.20%) على التوالي( كما تفوق محلول التمديد التجاري ويشكل معنوي (P < 0.05) في معظم مؤشرات سرعة النطف على بقية المحاليل الاختبارية بينت نتيجة اختبار قياس مستوى فوق أكسيد الهيدروجين وجود فرق معنوي (P < 0.05) بين محاليل تمديد السائل المنوي المدروسة، وأن إضافة فيتامين B12 إلى محاليل تمديد السائل المنوي المحتوية على جزيئات LDL كان له دور مهم في خفض مستوى فوق أكسيد الهيدروجين مع زيادة تركيز فيتامين B12 في محاليل التمديد الاختبارية. بلغت قيمة فوق أكسيد الهيدروجين (5.98 / 8.89 2017/ في محاليل التمديد الشاهد التجاري μM/L 2.70 µM/L 4.94 «μM/L 6.46 «µM/L والشاهد (LDL8) والمحاليل الاختبارية المحتوية على (1، 2، 3، 4 ملغ (مل) من فيتامين B12 على التوالي. أظهرت نتائج التجربة الثانية وجود تفوق معنوي (0.05>P) للسائل المنوي المعباً والمجمد في قشات 0.5 مل في مؤشرات حركة وسرعة النطف وكذلك مؤشرات حيوية وسلامة الغشاء البلازمي لنطف الماعز الشامي على السائل المنوي المعبأة والمجمد بقشات بحجم 0.25 مل. كما لوحظ عدم وجود فروق معنوية (P > 0.05) بين محاليل التمديد المختلفة بالنسبة لمؤشرات الحركة العامة وحيوية وسلامة الغشاء البلازمي لنطف الماعز الشامي، في حين لوحظ تفوق (P < 0.05) محلول الأندروميد في مؤشرات سرعة النطف (LIN) VCL) VSL VAP على بقية الممددات المدروسة، كما تشير النتائج إلى وجود تداخل معنوي بين العاملين المدروسين بالنسبة لمعظم مؤشرات حركة النطف وسرعتها وسلامتها. بينت نتائج التجربة الثالثة، عدم وجود فروق معنوية (P > 0.05) بين مجموعات الإناث الملقحة صنعياً بسائل منوي محمد بالمحاليل المختبرة (الأندروميد الشاهد المحلي EYC المضاف إليه 2 ملغ مل من فيتامين B12، ومحلول التمديد المحتوي على جزيئات LDL وفيتامين B12 بتركيز 2 ملغ / مل) في معدل الحمل (55.56 %44.44 ، 60%) على التوالي. خلصت الدراسة إلى أن استخدام محلول التمديد المحتوي على جزيئات LDL بتركيز 8% والمضاف إليه 2 ملغ مل من فيتامين B12 يمكن استخدامه بديلاً لمحلول الأندروميد المستورد في تمديد وحفظ السائل تخصص فيزيولوجيا الحيوان المنوي الذكور الماعز بهدف التلقيح الصنعى للحصول على أعلى نسبة ممكنة من الخصوبة الحقلية بالإضافة إلى ذلك يمكن استعمال فيتامين B12 كمضاد أكسدة لحماية النطف من الإجهاد التأكسدي خلال عمليتي التجميد والإذابة.