تنسيل مورثة العامل المحفز لنمو المحببات البشري GCSF والتعبير عنها في جراثيم الإشريكيا القولونية

Abstract

يعد العلاج البيولوجي أحد أحدث التدابير العلاجية للسرطان وأكثرها نجاعة وفعالية، إلا أن كلفته الباهظة وصعوبة الحصول عليه تحد من استخدامه على نطاق واسع. هدف بحثنا إلى تنسيل العامل البروتيني المحفز لنمو المحببات البشري GCSF الذي يعمل على تحفيز انقسام وتمايز العدلات داخل نقي العظم وتحررها في الدم، ويستطب في وقاية مرضى السرطان المثبطين مناعياً من الأخماج المتكررة نتيجة تلقيهم العلاج الكيميائي أو الشعاعي. أجري تفاعل PCR لتضخيم ال DNA المتمم لـ RNA المستخلص من خلايا الغلالة البيضاء المستنبتة مخبرياً باستخدام مرئسات نوعية المورثة GCSF، وظهر ناتج تضخيم بالطول المتوقع 70 بعد ترحيل نواتج التضخيم على هلامة الأغاروز 1% ربط ناتج التضخيم مع بلاسميد من النمط PET15-b) باعتماد التنسيل الموجه، واستخدم البلاسميد المؤشب في استحالة سلالة خاصة من جراثيم الإشريكية القولونية المهيئة تم التأكد من هوية المورثة المؤشب بتفاعل السلسلة وخلوه من الطفرات باستخدام البلاسميد المنقى من إحدى المستعمرات الجرثومية إيجابية التنسيل. كشف عن التعبير المورثي المورثة GCSF في الجراثيم بواسطة الرحلان الكهربائي للبروتين على هلامة الأكريل أميد 15%، حيث ظهرت عصابة بروتينية متوافقة مع الوزن الجزيئي المتوقع للبروتين (18.8) كيلو دالتون وزادت كثافتها بعد التحريض. تشير نتائجنا إلى نجاح تنسيل منتسخ مورثة GCSF في الجراثيم وحصولنا على سلالة جرثومية تعبر عن العامل المحفز لنمو المحببات، والتي يمكن أن تشكل ركيزة لإنتاج البروتين العلاجي في المستقبل القريب على المستوى الصناعي. الكلمات المفتاحية: مورثة GCSF، السرطان، تنسيل، تعبير مورثي