إنتاج الأجنة ونقلها في الأبقار الشامية

Abstract

إنتاج الأجنة ونقلها في الأبقار الشامية نفذت الدراسة خلال الفترة 2009-2012 في محطة بحوث دير الحجر للأبقار الشامية، إدارة بحوث الثروة الحيوانية الهيئة العامة للبحوث العلمية الزراعية، وبمخبر نقل الأجنة في إدارة بحوث الثروة الحيوانية. بينما جلست الأجنة بمخبر كلية الهندسة التقنية في جامعة حلب. استخدمت 45 بقرة شامية بمواسم انتاجية مختلفة (51) ويعمر راوح بين 30 و 92 شهراً، الرصد ديناميكية الجريبات المبيضية للأبقار الشامية المعاملة هرمونيا، وتوقيت الشبق أثناء نمو الجريب المبيضي السائد أو خلال تراجعه وتحديد فعالية الهرمون المحرر الموجهة الفقد GnRH أو هرمون بول المرأة الحامل HCG في إحداث الإباضة أثناء نمو الجريب السائد في الموجة المبيضية الأولى، وتحديد كمية ونوع الهرمون المعرض للإباضة الأمثل في معدل الإباضة وعدد الأجنة وحيويتها، وتحديد الموعد الأمثل للتلقيح الصناعي في معدل الإخصاب، وعدد الأجنة وحيويتها بغرض نقلها وتجميدها أو تجليسها في الأبقار الشامية. فحصت المبايض يوميا عدة مرات باستخدام جهاز راسم الصدى لتتبع ديناميكية نمو الجريبات السيضية والجسم الأصفر. خصص الجزء الأول من التجربة الأولى الدراسة توقيت الشيق في 26 بقرة شامية وزعت عشوائيا على اربع مجموعات متوسط عمرها 4.24458.99 شهرا، ومتوسط مواسمها الإنتاجية 2.70-30. الموسم. أودعت لوالب CIDR (138) غ بروجسترون) في مهابل أبقار المجموعتين 1 (ن (8) و 2 (ن (8) لمدة 7 أيام و حقن GnRH (50) ميكروغرام gonadorelin diacetate tetrahydrate) في اليوم 5 المجموعة الأولى)، واليوم 9 (المجموعة الثانية من دورة الشيق، بينما حققت أبقار المجموعتين (3 (0-5)، و 4 (0-5) بهرمون GnRH بالجرعة ذاتها، وفي الموعد ذاته اليوم 5 أو 9 على التوالي، من دورة الشيق دون إبداع الوالب في مهابلها، وخفن البروستا غلاندين عضلياً بعد 7 أيام من حقن GnRII في المجموعات كافة بمعدل 500 ميكروغرام كلوبروستينول cloprostenol استخدم في الجزء الثاني من التجربة الأولى 15 بقرة شامية الإحداث الإباضة وتوقيتها، وزعت الحيوانات عشوائياً بصورة متساوية على ثلاث مجموعات متوسط عمرها 5.94455.77 شهرا، ومتوسط موسمها الإنتاجي 2.67-021 تركت مجموعة الشاهد بلا معاملة (المجموعة (1)، وحققت أبقار المجموعتين 2 و 3 عضاياً في اليوم الخامس من دورة الشيق إما بـ GnRH ) ميكروغرام بوسيرلين، المجموعة (2) أو 3000 وحدة دولية من هرمون hCG المجموعة (3). بينما خصصت الحيوانات (29) في التجربة الثانية بهدف إنتاج الأجنة، وزعت الحيوانات عشوائياً إلى 6 مجموعات متوسط عمرها 56.09-140 شهراً ومتوسط موسمها الإنتاجي 261-0.31 حسب نوع مستحضر هرمون FSH وكميته، وموعد التلقيح الصناعي أودعت القوالب CIDR الحاوية على 138 بروجسترون في مهابل أبقار المجموعات الأربع الأولى A و B و C و D) لمدة 7 أيام، وحققت أبقار المجموعة (51) و (ن (6) عضلياً بل جرعات متناقصة تدريجيا اعتباراً من اليوم الرابع من تركيب اللولب ولمدة 4 أيام مرتين يوم) من هرمون FSH قدرها 400 و 200 مع NIH-FSH-P1 على التوالي. وأعطي GnRH بمعدل 100 ميكروغرام gonadorelin diacetate tetrahydrate بعد نزع اللوالب به 36 ساعة بينما حققت الأبقار في المجموعتين C (40) و (4) عضليا 750 وحدة دولية من مستحضر يحتوي هرموني FSH و LH في الموعد ذاته وبمقدار 8 جرعات متناقصة تدريجيا، أما المجموعتين E و F فحلات بهرمون PMSG في اليوم التاسع من دورة الشيق بجرعة قدرها 2000 وحدة دولية (5)، و 4000 وحدة دولية (5) على التوالي حقن البروستا غلاندين 20 بمعدل 750 ميكروغرام كلوبروستينول عضليا لكافة الحيوانات قبل 12 ساعة من نزع اللوالب في المجموعات الأربع الأولى، وبعد يومين من حقن هرمون PMSG للمجموعتين الأخيرتين لتحت الأبقار صناعياً مرتين بعد 12 و 24 ساعة من ظهور الشيق في كافة المجموعات عدا المجموعة C التي لقمت فيها الأبقار صناعياً بعد 0) و 12 ساعة من ظهور الشيق جمعت الأجنة بعد 7 أيام من بده الشيق باستخدام الطريقة غير الجراحية بواسطة قسطرة ثلاثية الشعب، وتحث عن الأجنة بواسطة المجسام الضوئي، وعزلت لتقييمها. جمد في التجربة الثالثة 48 جنيناً من الدرجة الأولى والثانية في كل من مرحلتي الكيس الأرومي ان 28) والتويتة (ن (20) بطريقة التزجيج vitrification باستخدام محلول نهائي مكون من 10% سيروم تم العجل - 90% PBS يحتوي على 16.5% إتيلين غليكول و 16.5% داي مثيل سولفوكسيد و 0.5 مول البتر سكروز غبنت 31 أجنة في قشات 0.25 مل في وسط التجميد، وغمرت مباشرة في السائل الأزوني وحزنت فيه لنحو 4 أشهر أنبيت القشات الحاملة للأجنة في حمام مائي حرارته 39 م وفرعت محتوياتها في طبق بنزي، ونقلت إلى محلول مكون من 10% سيروم دم العجل - 90% PBS ويحوي على السكروز بتركيز 0.25 مول ل لمدة 1 دقيقة، ومن ثم بتركيز 0.15 مول ل لمدة 5 دقائق، وبعدها بتركيز 0 مول إلى لمدة 5 دقائق أخرى. وضعت بعدها في حاضنة درجة حرارتها 38.5 م في جو رطب ونسبة غاز502 لمدة 4-5 ساعات، ثم أخرجت من الحاضنة وقيمت الأجنة شكلياً إلى أجنة صالحة للنقل وأخرى غير صالحة للنقل. أما في التجربة الرابعة فقد استخدم 13 جديداً بمرحلة التويتة أو الكيس الأرومي شعب منها 1-2 خلية باستخدام إبرة رفيعة مركبة على مجهر مطلوب وأجري تضخيم الDNA المستخلص من الخلايا الجنينية بواسطة تقانة تفاعل البوليميريز المتسلسل المتعدد PCR، واختبر 16 بادئ لتحديد المناسب منها في التجنيس أظهرت نتائج الجزء الأول وجود تأثير معنوي ( 0.01) الموعد المعاملة ونوعها في ديناميكية العدد اليومي للجريبات الصغيرة والكبيرة، وبلغ معدل الإباضة بعد حقن هرمون GnRH 100 بالنسبة للمجموعتين 1 و 3، ونحو 25% و 40% في المجموعتين 2 و 4 على التوالي واستجابت جميع الأبقار الشامية المعاملة البروتوكولات توقيت الشيق الذي حدث مرور نحو 1.1549.54 ساعة من حقن البروستا علائدين، وحدثت الإباضة بعد نحو 1.05:72.46 ساعة من حقن PGF20. ولم تؤثر نوع المعاملة في كل من موعد الشيق حان PGF2، وفي قطر الجريب السائد عند الشيق، وبالمقابل كان قطر الجريب الساك عند الإباضة أعلى ما يمكن (0.01) في المجموعة 4 (15.70 0.38 مم)، وأقل ما يمكن في المجموعة 2 (0.3014.36 مم كما تأخر موعد الإباضة ( 0.05 بعد حقن فرمون PGF2 في .)المجموعة 4 إلى 76.85 2.21 ساعة مقارنة مع المجموعة 1 (68.96±1.77 ساعة أظهرت نتائج الجزء الثاني من التجربة الأولى تغيراً في ديناميكية الجريبات المبيضية بعد حقن هرموني GnRH و hCG وحدثت الإباضة بمعدل 5/5 و 5/4 في المجموعتين 2 و 3 على التوالي، ولم يتأثر قطر الجسم الأصفر الأصلي أو الثانوي المتشكل بعد الحقن بنوع المعاملة. أظهرت نتائج التجربة الثانية وجود فرق معنوي بين مجموعات التجربة المعاملة بالهرمونات الموجهة C 1.54±80.34 : 3.59±70.58 ( في معدل الإباضة PMSG LH/FSH FSH( تند 61.20±0.01:13.94)، وفي F 13.8543.54 :E 4.30 81.40 :D -2.77-72.90 E3.5782.14 :D 3.97±64.70°C 3.31±82.32 85.35485.10 :A( نسبة الإخصاب B 0.295.50 ( 8.16±0.05186.67)، وفي عدد الأجنة القابلة للنقل :F3.56±65.42 10.29-2:50 F 0.29±1.50 E 0.67±5.674 :D 0.29-3.50° C 0.41±6.00 p 0.01)، وتفوقت هذه المؤشرات بصورة معنوية في المجموعات المعاملة بهرمون FSH مقارنة مع نظيراتها المعاملة بهرمون PMSG. في التجربة الثالثة لم يلحظ وجود تأثير معنوي المرحلة الجنين أو نوعيته اعتماداً على حجم كتلة الجنين المتماسكة المجمدة في معدل بقاء الأجنة، وكانت هذه النسبة في التويتة نحو 66.7%، و 50.0% عندما كانت درجتها جودته 1 و 2، على التوالي، بينما كان المعدل في مرحلة الكبس الأرومي 73.3% للنوعية 1 و 53.8% للنوعية 2 للأجنة المجمدة. نجح تجنيس الأجنة باستخدام زوجين فقط من البادئات (P2sex Plsex و PAut Plut) من ال16 المدروسة حيث أظهرت حزمة DNA ذات الحجم الجزيئي 141 أساس أزوتي دالة على الصبغي الجنسي لا المميز للجنين الذكر، وغابت تلك الحزمة في أجنة الإناث. سجلت 3 حالات حمل في أبقار شامية مستقبلة نقلت إليها أجنة أبقار شامية، إلا ولدت بقرنان بينما نفقت البقرة الثالثة وهي حامل بعمر 7 شهر، مما يشير إلى إمكانية نجاح نقل الأجنة في هذا العرق المحلي. واستنتج أن حقن الأبقار الشامية في اليوم الخامس من دورة الشبق بالمعدلات المدروسة من هرموني GnRH أو hCG يساعد في ظهور موجة مبيضية وتحدث الإباضة بعد 24-48 ساعة من الحقن شريطة وجود حويصل مبيضي ساند. كما استنتج أن الأبقار الشامية تستجيب كيفية العروق الأخرى البرامج الإباضة المتعددة، ويمكن تقليل كمية هرمون FSH بنحو 50% (200 مغ) في حين لا ينصحباستخدام هرمون PMSG لوحده، وأن أفضل وقت للتلقيح الصناعي يكون مرتين بعد 12، و 24 ساعة من بدء الشيق في برامج نقل الأجنة، ويمكن حفظ أجنة الأبقار الشامية بالتزجيج بتكلفة قليلة الموانع التجميد دون وجود تأثيرات سلبية كبيرة في نوعيتها. كما يمكن استخدام بادلات نوعية لتجنيس أجنة الأبقار الشامية بما يفيد في تقنيات نقل وتقسيم الأجنة المرغوبة في عمليات التحسين الوراثي. توصي هذه الدراسة بإجراء مزيد من الدراسات المتعلقة بتجميد أجنة الأبقار الشامية بطريقة الترجيج، واختيار الأجنة المجلسة أنثويا وزرعها في أبقار مستقبلة كمنطلق الإكثار هذا العرق وإعادة انتشاره. الكلمات المفتاحية: توقيت الشيق إنتاج الأجنة، تجميد الأجنة التجنيس الأبقار الشامية.