توصيف الأنكسين ٥ المندمج مع البروتين المتفلور الأخضر عالي الطي وتحري تطبيقاته المحتملة

Abstract

.الألكسين - أو ANXV هو بروتين ينتمي لعائلة من البروتينات السيتوبلازمية تعرف بالأنكسينات. يتميز بقدرته على الارتباط بالفوسفاتيديل سيرين PS أحد الشحوم الفوسفورية المكونة للغشاء الخلوي، بإلفة عالية و بوجود شوارد الكالسيوم بعد ANXV مسيرا نوعيا وحساساً للكشف عن ظاهرة الموت الخلوي المبرمج الذي يترافق بتغير تموضع PS من داخل الغشاء الخلوي إلى خارجه إلى جانب ذلك، يستطيع ANXV الارتباط مع أي حويصلات حاوية في طبقاتها الغشائية على PS مهما كانت صغيرة، مثل الصفيحات الدموية والحويصلات خارج الخلوية وحتى البني الثانوية مثل الليبوزومات نظراً للأهمية التطبيقية البروتين ANXV يتم إنتاجه مخبرياً بشكله الماشوب وتنقيته ووسمه بمركبات متطورة مختلفة مثل الفلوريسين، ثم توظيفه في الدراسات الخلوية والنسيجية الخاصة بالتعرف على الخلايا المتموتة وعدها. إن توفر البروتين المنظور الأخضر GFP وخاصة بشكله عالي الطبي بعد بديلاً مغرباً جاهزا لاستخدامه كواسمة مندمجة مع ANXV تنتج بالتنسيل المورثي وتكون مصدراً مستقراً ودائماً لبروتين وظيفي مندمج يتولى فيه ANXV وظيفة الارتباط بجزيئات PS، في حين يمكن تتبعه من خلال فلورة GFP، علاوة على الميزات الأخرى التي تضفيها هذه الواسعة في زيادة الإنتاجية وتحسين الخصائص الفيزيوكيميائية لبروتين ANXV شرح البحث إنتاج ANXV البشري المأشوب في خلايا بدائيات وحقيقيات النوى بالاعتماد على تقانة البروتينات المندمجة للحصول عليه كبنية بروتينية جديدة مندمجة ولأول مرة مع الشكل عالي الطلي من البروتين المتفور الأخضر خلال البحث تم إنتاج البروتينات التالية: SIGFP-ANXV و ANXV و SIGFP بعد تنسيل المورثات المرمزة لها ضمن بلازميد PRSET للتعبير في بدائيات النوى أو بلازميد PoDNA للتعبير في حقيقيات النوى جميع هذه البروتينات تم إنتاجها بشكلها المنحل ثم تنقيتها بطريقة الاستشراب بالإلفة بفضل احتوائها على واسمة متعدد الهيستيدين من النهاية الأمينية حيث بلغ الناتج البروتيني 50mg/L من وسط الزرع البكتيري و mg/ml من وسط الزرع الخلوي، كما شرح البحث مراحل تمنيع الأرنب ببروتين ANXV النقي.بهدف الحصول على ضده النوعي متعدد النسيلة، الذي استطاع كشف والنقاط ANXV في الاختبارات المناعية وبالتالي يمكن توظيفه في تحديد تركيز ANXV في العينة المدروسة أو تحديد موقعه في النسيج الحي. بالاستفادة من تقانة البروتينات المندمجة تأكدت صحة علي البروتين المندمج المنتج 6xHis-sGFP-ANXV من خلال تفاعله مع الأضداد الثلاث النوعية الأجزاءه المختلفة والموجهة نحو SIGFP أو ANXV أو 6xHis حيث كشف باختبارات ELISA والتبصيم المناعي، كما أثبتت نتائج البحث الفعالية البيولوجية لبروتين SIGFP-ANXV من خلال قدرته على ربط PS الحر أو المعروض على سطح الليبوزومات أو الخلايا المتموتة باستخدام تقنيات متعددة منها ELISA والتبصيم النقطي والحساس الحيوي بالإضافة إلى المجهر المنظور ومقياس التدفق الخلوي أظهر البحث أن sfGFP-ANXV كان أكثر حساسية من ANXV الموسوم كيميائياً في الكشف المبكر عن الخلايا الداخلة في الموت الخلوي المبرمج بالإضافة لكونه واسما مهما لعملية الموت الخلوي المبرمج، تبين أن ANXV ذو صلة بالعديد من العمليات الخلوية والتغيرات الفيزيولوجية أو المرضية كالسرطان في هذا البحث، درس أثر معاملة الخلايا السرطانية ببروتين ANXV وذلك بوجود معالجات كيميائية أو غيابها وأظهرت النتائج أثره في زيادة عيوشية الخلايا السرطانية ووقاية أغشيتها الخلوية من مسببات النفوذية والسمية الخلوية مما يسترعي الانتباه لتتبع ذلك الأثر على المستوى الجزيئي والإشاري. إن التعبير العالي والوظيفي عن SIGFP-ANXV يزودنا بأداة جزيئية سريعة وفعالة وحساسة يمكن إنتاجها بأسعار مقبولة للكشف عن PS، كما يمكن توظيفها في العديد من التطبيقات الطبية الحيوية مثل تحضير الليبوزومات الوظيفية، تتبع الحويصلات خارج الخلوية وكشف الموت الخلوي المبرمج في الزجاج أو في الجسم الحي. الكلمات المفتاحية: الأنكسين . GFP البروتينات المندمجة التعبير البروتيني التحوير الخلوي الموت الخلوي المبرمج الشحوم الفوسفورية الليبوزومات الحويصلات خارج الخلوية الحساس الحيوي المواد الثانوية.