تنسيل مورثة عامل التخثر التاسع والتعبير عنها في خلايا الثدييات

Abstract

الملخص يعد الناعور ب، أو ما يسمى الهيموفيليا ب، من الأمراض الوراثية ذات الأهمية الكبرى والتي تؤدي إلى حدوث إضطرابات في تخثر الدم وتوقف النزف، حيث يشخّص المرض بنقص في كمية وفعالية عامل التخثر التاسع البشري مما يؤدي إلى تثبيط تشكل الخثرات الضرورية لإيقاف النزوف التلقائية أو المحرّضة بالآفات المختلفة. لقد ساهم حديثاً اصطناع الأدوية البيولوجية المتضمنة للعامل التاسع المأشوب rFIX في التدبير الجيد لمرضى الناعور ب وتحسين جودة حياتهم. مع ذلك، يشكل ارتفاع ثمن هذه الأدوية البيولوجية أحد المحدّدات الأساسية في تلقي شريحة كبيرة من المرضى للجرعات المناسبة والكافية لمعاكسة النزوف لديهم. هدفنا في هذا البحث إلى تنسيل مورثة العامل التاسع البشري وإنتاجه في منظومات تعبير جيني لحقيقيات النوى، مع الأخذ بعين الاعتبار التعديلات اللاحقة للترجمة التي تطرأ على العامل التاسع البشري في خلايا الكبد، والضرورية للقيام بوظيفته في تحريض تشكل الخثرات وإيقاف النزف. إلا أن العديد من التحديات واجهتنا، بدءاً من الصعوبة الكبيرة في الحصول على عينات كبد بشرية ملائمة، وانتهاءً بظروف البنية التحتية في المختبرات والتي حالت دون تحقيق أهداف هذا البحث. إذ، وعلى الرغم من قيامنا بكافة الخطوات العملية المطلوبة، من عزل الرنا من عينات الخزعات الكبدية التي حصلنا عليها، واصطناع الدنا المتمم، وتضخيمه باستخدام بادئات نوعية لعامل التخثر التاسع البشري ثم التأكد منها عبر وسائل المعلوماتية الحيوية، وتنسيله في البلازميد المناسب للتعبير، وتحوير خلايا الجراثيم به، جاءت نتيجة السلسلة النهائية لمنتج التضخيم سلبية ولم نتمكن من الحصول على تسلسل عامل التخثر التاسع للانتقال إلى الخطوات اللازمة للتعبير عنه. وتشير النتائج السلبية لبحثنا إلى ضرورة عزل الرنا المرسال الخاص بعامل التخثر التاسع البشري من خطوط خلوية كبدية بشرية لم نتمكن من الحصول عليها خلال فترة إجراء البحث.