التوصيف والبصمة الوراثية لعزلات محلية من بكتريا العقد الجذرية (Rhizobia) وتقييم كفاءتها في تثبيط بعض الفطور الممرضة للبقوليات

Abstract

الملخص نُفّذ البحث في كلية الزراعة-جامعة دمشق، ومخابر الهيئة العامة للتقانة الحيوية بين عامي 2018-2024. هَدَفَ البحث إلى عزل بكتريا الريزوبيا من جذور بعض البقوليات، وتعريف العزلات وكشف القرابة الوراثية بينها باستخدام تقنية rep-PCR DNA fingerprinting technique، واختبار القدرة التضادية لتلك العزلات تجاه الفطر المعزول محلياً المسبب للذبول الوعائي في الحمص Fusarium oxysporum f. sp. Ciceris، كما هدف إلى أَمْثَلَةِ بعض الشروط لإنتاج سماد حيوي محلي باستخدام عزلة ريزوبية متفوقة. جمعت عينات النباتات البقولية (فول، حمص، بازلاء، حندقوق، فصة، نفل بريسم، فول الصويا، الحلبة، بيقية، عدس) من عدة محافظات (ريف دمشق، حمص، درعا، السويداء، اللاذقية، حماة الرقة)، وعُزلت البكتريا من العقد الجذرية لهذه النباتات على وسط أغار الخميرة والمانيتول YMA) Yeast mannitol agar). نتج عن العزل 109 عزلات بكتيرية، انتمت 42 منها إلى مجموعة ريزوبيا، و19 عزلة لبكتريا Rhizobacteria اعتماداً على نتائج الاختبارات الحيوية الكيميائية والجزيئية والعدوى الاصطناعية، وقسمت العزلات الريزوبية تبعاً لنتائج العدوى التصالبية إلى أربعة أجناس: Mesorhizobium المتعايش مع نبات الحمص، و Rhizobium مع الفول والبازلاء، و Bradyrhizobium مع فول الصويا، و Ensifer مع الفصة والحندقوق. أظهرت نتائج البصمة الوراثية أن تقانة REP-PCR أعطت أعلى تعددية شكلية بين العزلات البكتيرية، وبلغت نسبة التشابه بين العزلات المدروسة والعزلات المرجعية بين 38% و83%، وتوزّعت العزلات البكتيرية للريزوبيا ضمن شجرة القرابة الوراثية إلى أربع مجموعات ارتبط توزع اثنتين منها بالمنطقة الجغرافية المجموعة الأولى ضمت العزلات المرجعية و9 أنماط وراثية للجنس Mesorhizobium من محافظة السويداء، والمجموعة الرابعة ضمت نمطين للجنس Bradyrhizobium من الرقة، بالمقابل ضمت المجموعة الثانية 4 أنماط وراثية للجنس Sinorhizobium Ensifer المتعايش مع نباتات الحلبة والحندقوق والفصة من محافظتي ريف دمشق وحمص، بينما ضمت المجموعة الثالثة 4 أنماط وراثية للجنس Rhizobium من ريف دمشق وحمص والسويداء. بينت نتائج التضاد المخبري بين العزلات البكتيرية التي انتمت لمجموعتي Rhizobia و Rhizobacteria، وعزلتين فطريتين لذبول فوزاريوم الحمص المعرفة محلياً F51 و F63)، أن 31 عزلة بكتيرية ثبطت النمو الفطري، منها 13 عزلة من مجموعة الريزوبيا و18 عزلة من البكتريا الجذرية (Rhizobacteria)، وتفوقت العزلتان 134 Rhizobium) و 61 Mesorhizobium) على بقية العزلات في تثبيط الفطر بنسبة تثبيط بلغت 68.89% و53.70% على التوالي. عند اختبار العزلة 61 على نباتات الحمص ضمن الأصص أظهرت النتائج أن التلقيح ببكتريا ريزوبيا زاد تحمل النبات للمرض الفطري حيث أدى إلى انخفاض في شدة المرض ونسبة الإصابة. كما أظهرت نتائج أمثلة بعض شروط إنتاج السماد الحيوي باستخدام العزلة 134 تفوق درجة الحرارة 4°س في حفظ حيوية البكتريا وبلغت مدة الحفظ 4 أشهر بينما بلغت 3 أشهر عند درجة حرارة 25°س، ومن ناحية أخرى، فقد كانت التربة المنخولة أفضل المواد الحاملة للبكتيريا تلاها البيرلايت ثم التورب، وقد بلغ تركيز البكتيريا أعلى قيمة له في الشهر الثاني من التلقيح على اختلاف المواد الحاملة ودرجات الحرارة المختبرة في التجربة. الكلمات المفتاحية ريزوبيا، الاختبارات الحيوية الكيميائية، النباتات البقولية، سوريا، تقانة -rep PCR، فوزاريوم الحمص، التضاد، سماد حيوي، مادة حاملة.