دراسة التعبير عن جين SODB1 في سلالة من الليشمانيا المدارية L tropica وإنتاج البروتين المأشوب rSODB1 واختبار استمناعيته

Abstract

تشكل أنزيمات فوق أوكسيد دیسموتاز SOD) Superoxide Dismutases) مجموعة كبيرة من الأنزيمات المعدنية Metalloenzymes تقوم أنزيمات SODs بتفكيك Dismutation الجذور الحرة لشاردة فوق الأوكسيد إلى بيروكسيد الهيدروجين والأوكسجين الجزيئي وتحمي بذلك الخلايا من أثرها الضار. وقد بينت العديد من الدراسات أنه يمكن لبروتينات SOD المحضرة بشكل مأشوب ولجيناتها المنسلة ضمن حوامل تعبير جيني أن تولد استجابة مناعية تحمي النماذج الحيوانية من الإصابة التجريبية بطفيليات الليشمانيا. ونظراً لعدم وجود دراسات حول تحضير جينات أو بروتينات SODs لنوع tropica ... ودراسة دورها الاستمناعي، فقد غزلت في هذه الدراسة سلالة محلية من الليشمانيا المدارية L tropica ودرس التعبير عن جينات fesodb في طوري نموها أمامي وداخلي السوط، بوساطة تقانة RT-PCR تؤكد النتيجة وجود تعبير عن كل من الجينتين fesodb1 و fesodb2 في كلا الطورين عزلت بعدها الجين fesodb1 من جينوم هذه العزلة بوساطة PCR باستعمال شفع من المرئسات المصممة لتضخم كامل المنطقة المرمزة لهذه الجين. من ثم ربطت نواتج PCR المنقاة بحامل التعبير الجيني pCI، ونقلت الجين fesodb1 بعد ذلك إلى حامل التعبير الجيني PRSET. يمكن الحامل pRSET من إنتاج البروتين FeSODBI مدمجاً مع واسمة من عديد الهيستيدين مما يمكن من الكشف عن البروتين بوساطة ضد نوعي، ويسهل عملية التنقية باستعمال كروماتوغرافيا الإلفة المعدنية. في حين يستعمل الحامل PCI القادر على إنتاج البروتين في الخلايا حقيقيات النوى كحامل للقاحDNA وعزلت كذلك في هذه الدراسة الجين fesodb2 ونسلت ضمن الحامل pRSET. ومن ثم أنتج البروتين المأشوب FeSODB1 وتمت تنقيته واختبار استمناعيته بإجراء تبصيم مناعي مع أمصال مرضى مصابين بالليشمانيا المدارية. وقد أظهرت النتائج إمكانية استعمال هذا البروتين كأداة مساعدة في التشخيص. وبالنتيجة، توصلنا في هذه الدراسة لتحضير أدوات جزيئية من النوع L tropica البروتين الماشوب 1 FeSODB والبنية البلاسميدية pC-fesodb1، والتي يُمكن اختبار دورهما الوقائي في دراسات لاحقة.