استقصاء إمكانية استخدام بعض مورثات المستضدات السطحية المساهمة في الآلية الإمراضية لطفيليات الليشمانية المدارية لتحضير لقاح للوقاية من الليشمانية

Abstract

الخلفية وهدف الدراسة: تعد سورية من المناطق الموبوءة بداء الليشمانيات الجلدي المسبب بشكل أساسي بالليشمانية المدارية، ونظراً لعدم وجود دواء نوعي أمن وفعال، تكتسب الوقاية أهمية كبيرة للحد من انتشار هذا الداء لهذا هدفت دراستنا إلى تحري وجود جين Kinetoplast Mitochondrial membrane protein وجين /KMP-11/ Membrane Protein /27 في سلالة الليشمانية المدارية المستخدمة في دراستنا وتحري التعبير عنه، واستقصاء إمكانية استخدام الجينات السابقة كلقاح دنا بإستخدام البلازميد pCI المواد والطرائق تم استخلاص الدنا الجينومي والرنا من مشيقات طفيليات الليشمانية المدارية للسلالة السورية 01 LCEB-Syrian strain، تم إجراء تفاعل PCR لإثبات وجود الجينات في الدنا الجينومي والدنا المتمم الذي يثبت التعبير عن هذه الجينات تم تحضير بلازميدات مؤشبة يجين 27 وبلازميدات مؤشبة بجين 11-KMP لاستخدامها لتلقيح فئران Balb/c. تم تمنيع الفئران بثلاث جرعات من البلازميدات المؤشبة أو بمزيج منها بفاصل ثلاث أسابيع، وذلك بالحقن العضلي في فخذ الرجل اليمنى. تم إجراء اختبار التحدي بحقن 2 مليون طفيلي في أسفل القدم اليمني تحت الجلد، ومتابعة تطور الآفات اسبوعياً لتسعة أسابيع وذلك بقياس حجمها مقارنة مع القدم الأخرى للفئران تمت مقايسة الانترفيرون عاما والانترلوكين 12 والانترلوكين 4 في مصول الفئران الممنعة والشاهدة قبل التحدي وفي الأسابيع الثالث والسادس والتاسع بعد التحدي بواسطة طريقة مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالأنزيم ذي الشطيرة. تم تحديد الحمل الطفيلي في الآفات الجلدية والعقد اللمفاوية النارحة في الأسبوع التاسع بعد التحدي. النتائج: تمت سلسلة جين 11-KMP وجين 27 عند سلالتنا من الليشمانية المدارية، وتم تحديد نسب التشابه مع الأنواع الأخرى من الليشمانية، وتسجيل تسلسل جين 27 في بنك الجينات. بينت نتائجنا أن التمنيع بمزيج مكون من 100 مكغ من بلازميدات PCI المؤشبة يجين -KMP 11 و 100 مكع من بلازميدات مؤشبة بجين 27 يؤدي إلى وقاية جيدة للفئران من الاصابة الجلدية الناجمة عن طفيليات الليشمانية المدارية، حيث انخفض حجم الإصابة بعد 3 و 6 و 9 أسابيع بنسبة 80% و 90% و 92% على التوالي، مقارنة بالاصابات التي ظهرت لدى المجموعة 132 الشاهدة، كما انخفض الحمل الطفيلي في نهاية فترة التحدي بشكل شبه كامل في كل من الآفة الجلدية والعقد اللمفاوية النازحة، مقارنة مع المجموعة الشاهدة بينت نتائج مقايسة السيتوكينات أن التمنيع بالبلازميد الفارع أو بالدارنة الفوسفاتية ترافق مع استجابة مناعية من نمط TH2 واصابة شديدة، بينما أدى التمنيع بالبلازميدات الماشوبة إلى استجابة مناعية من نمط TH1 سمحت بالوقاية المذكورة والسيطرة على الخمج بشكل جيد.