توصيف عزلات محلية من البكتريا المسببة لمرض سل الزيتون Pseudomonas savastanoi pv. savastanoi وتقييم كفاءتها في إفراز حمض الإندول الخلي

Abstract

)Pss) Pseudomonas savastanoi pv. savastanoi يعد مرض سل الزيتون الذي تسببه البكتيريا من الأمراض الهامة التي تصيب شجرة الزيتون في سورية. تم الحصول على 46 عزلة بكتيرية من عينات نباتية تبدي أعراض المرض (تقرحات، أورام، تأليل مجموعة من 20 بستان من محافظتي اللاذقية وحماه بينت نتائج الاختبارات البيوكيميائية أن 28 عزلة موافقة لصفات بكتيريا Pss، بالمقارنة مع أربع عزلات محلية مرجعية (32، 34 ، B46 A77). بعد إجراء العدوى الاصطناعية على أفرع الزيتون (صنف دان أعطت العزلات المختبرة (32) عزلة) أعراض مرض سل الزيتون باستثناء العزلات sav32 sav31 ،sav28 sav27 طبقت تقانة Colony-PCR على جميع العزلات السابقة، باستخدام Indol-3-Acetyl-L-Lysine synthetase يكشف عن المورثة التي ترمز لأنزيم iaal زوج بادئات الذي يتوسط إنتاج حمض الإندول الخلي (IAA)، وزوج بادئات يكشف عن المورثة ptz التي ترمز الأنزيم Isopentenyl transferase الذي يتوسط إنتاج السيتوكينين. أظهرت نتائج الرحلان الكهربائي على هلامة أغاروز 1% حزمة iaal بوزن جزيئي 454 bp وحزمة ptz بوزن جزيئي bp481 في العزلات الموافقة لصفات Pss البيوكيميائية والتي أعطت أعراض مرض سل الزيتون بينما لم تظهر هاتان الحزمتان في العزلات sav32 sav31 sav28 sav27 طبقت تقانات البصمة الوراثية rep-PCR لتمييز العزلات عن بعضها البعض بهدف رسم شجرة القرابة الوراثية حيث أظهرت نتائج الرحلان الكهربائي لتقانات rep-PCR وجود حزم مميزة تراوحت أوزانها بين p100 و bp1400 توزعت لـ /24 و 12 و 12 حزمة لتقانات ERIC-, REP-, BOX-PCR على التوالي، وحسبت مصفوفة التشابه لنتائج البصمة الوراثية لتقانات rep-PCR لعزلات Pss باستخدام برنامج 1.32 POPGENE حسب معامل N (1978) حيث تراوحت نسبة التشابه في العزلات البكتيرية المدروسة بين 40% و 100%. كانت العزلة sav21 المأخوذة من منطقة مصياف هي العزلة الأقرب للعزلة المرجعية (B46) بنسبة تشابه 85% في حين كانت العزلتان sav5.2 و sav10.a المأخوذتان من منطقة اللاذقية الأقرب للعزلة المرجعية (B46) بنسبة تشابه 80% كما رسمت شجرة القرابة الوراثية ذات الجذر لاختبارات (ERIC) Li و Nei بالاعتماد على معادلة Neighbor joining مجتمعة بتطبيق طريقة REP-, BOX-PCR( (1979) لكل تقانات rep-PCR انقسمت شجرة القرابة الوراثية إلى عنقودين أحدهما ضم العزلات المرجعية (3432، B46،77) والآخر انقسم إلى تحت عنقودين منفصلين حيث ضم تحت العنقود الأول عزلات منطقة مصياف (sav23 sav21 sav20) وضم تحت العنقود الثاني عزلات محافظة اللاذقية. وبالتالي تمكنت تقانات البصمة الوراثية من تصنيف عزلات Pss إلى ثلاثة عناقيد تبعاً لمصدر العزلة. كذلك بينت نتائج حساب تركيز حمض الإندول الخلي (IAA) في وسط الزرع وجود أو غياب الحمض الأميني tryptophan-2) معمل وسط الزرع قدرة جميع العزلات على إنتاج الحمض وبتراكيز متزايدة مع مرور الزمن حيث كان أعلى تركيز في اليوم الثالث من عمر المستعمرات وتميزت العزلة sav20 بإنتاج عال من حمض الإندول الخلي (256.10.67 438.751.54) ميكروغرام مل بغياب ووجود التربتوفان على التوالي، وقد أظهرت إضافة الحمض الأميني إلى زيادة ملحوظة في إنتاج الهرمون بشكل عام لجميع العزلات. كلمات مفتاحية: سل الزيتون، حمض الإندول الخلي (Pseudomonas savastanoi (IAA، تفاعلات rep-PCR