دراسة للكشف والتعرف على الفيروسات التابعة لعائلة Bacaloviridae المتواجدة طبيعياً على بعض حضرات رتبة الـ Lepidoptera في سورية

Abstract

تعد فصيلة الفيروسات العصوية Baculoviruses عوامل معرضة نوعية للحشرات ، وتضم هذه العائلة 4 اجناس منها و جنسي الفيروسات العصوية متعددة الوجوه NPV ) Nucleopolyhedroviruses ، والفيروسات الحبيبية GV ) Granulovirus ) والتي تكون محاطة بأجسام محتواة ضمنية OB ) occlusion bodies ) . هدفت الدراسة إلى عزل الأجسام المتضمنة من يرقات خمسة أنواع حشرية من رتبة حرشفيات الأجنحة Lepidoptera وهي فراشة الواي الفضية Autographa gamma ، وأبو دقيق الملفوف الصغير Pieris rapae ، ودودة ورق العنب Hyles lineata ، ودودة اللوز الأمريكية Helicoverpa armigera ، وأبو دقيق الخبازي Vanesa cardui . ثم جمع هذه الحشرات من مناطق مختلفة سورية خلال مواسم 2009-2011 . جمعت يرقات فراشة الواي الفضية A gamma . من نباتي الخبيزة Mava sylvestris ، والنجيل Agropyron L repens من بعض حقول دوما ريف دمشق ) ، وجمعت يرقات أبو دقيق الملفوف P. rapae من نباتات الملفوف Brassica oleracea والقرنبيط Brassica oleracea var . botrytis ، من بعض حقول الملفوف والقرنيط من ريف محافظة درعا ، أما يرقات دود ورق العنب H lineata فجمعت من بعض بساتين الكرمة في سعسع وجديدة عرطوز ( ريف دمشق و دوما وتم جمع يرقات دودة اللوز الأمريكية Harmigera من بعض حقول البندورة والفليفلة من ريف محافظة درعا ، وبالنسبة ليرقات أبو دقيق الخبازي cardui ... فقد جمعت من نباتي الخبيزة والنجيل من جديدة عرطوز وسعسع ودوما من محافظة ريف دمشق ، وجمعت يرقات دودة لوز القطن الأمريكية Helicoverpa ( Heliothis armigera من حقول القطن في منطقتي المالكية والقامشلي في محافظة الحسكة خلال موسم 2011 خلال مواسم 2009-2011 لم يتم إجراء أي مكافحة ميكروبية في جميع حقول وبساتين الدراسة التي تم اختيارها على الإطلاق . بینت الدراسة احتمال إصابة جميع اليرقات بالفيروسات العصوية Nucleopolyhedroviruses ، وفقا للأعراض الظاهرية . كما بينت النتائج أن النسبة المئوية لموت يرقات دودة اللوز الأمريكية المتسبب عن مرض فيروسي % 99 % في منطقة المالكية و 11.6 في منطقة القامشلي واختلفت النسبة المئوية لموت اليرقات الناتج عن إصابة فيروسية خلال أشهر الدراسة في منطقتي الدراسة ، إذ تراوحت النسبة بين % 1.5 % و 14.3 % ، و 2.9 % و 14.7 % في منطقتي المالكية والقامشلي على التوالي ، وكانت أعلى نسبة مئوية للموت في شهر أب في المنطقتين 14.3 في منطقة المالكية و 14.7 % في منطقة القامشلي عزلت الأجسام المحتواة الضمينة من هذه اليرقات في مخبر التقانة الحيوية في كلية الزراعة جامعة دمشق ، بينت دراسة المعلق الفيروسي المعزول من يرقات الحشرات المصابة حقلياً وجود الأجسام الضمينة ( OB ) في كل من حشرات فراشة الواي القضية A gamma ، وأبو دقيق الملفوف rapae ، ودودة ورق العنب H lineata ، ودودة اللوز الأمريكية . armigera ، وأبو دقيق الخبازي V.cardus التي تم جمعها حقلياً وكذلك في الحشرات المعداة و عند استخدام شرائح العد لعينات مأخوذة من أبو دقيق الخبازي كان عدد البوليهيدرا / 2.7 × 106 يرقة بينما كان العدد 3.1 10 عند أبو دقيق الملفوف و 2.2 105 عند دودة ورق العلب و 1.6 × 105 عند دودة اللوز الأمريكية و 3.6 × 10 عند فراشة الواي الفضية . أكدت الدراسة للأجسام الضمينة ( OB ) التي غزلت من اليرقات الميتة أو المصابة على أن هذه الفيروسات تابعة لجنس Nucleopoly he droviruses وذلك بدراستها باستخدام المجهر الضوئي ولعدم تلونها أثناء الصبغ بأزرق البرومو فينول أظهرت الـ OBS المنقى التي أجري لها رحلان كهربائي باستخدام هلامة البولي اكريلاميد 10 بعد الصبغ بـ brilliant blue R Coomassie أن وزنها الجزيئي 30 Da في كل من يرقات فراشة الواي الفضية A gamma ، وأبو دقيق الملقوف P rapae ، ودودة ورق العنب H lineata ، ودودة اللوز الأمريكية H.armigera ، وأبو دقيق الخبازي V.cardui بينت نتائج التشخيص الجزيئي الدقيق للفيروسات باستخدام اختبار الـ PCR وبادنات متخصصة بالكشف عن مورثة البوليهيدرين ، للحمض النووي المعزول من يرقات فراشة الواي الفضية A. gamma ، وأبو دقيق الملفوف rapae .... ودودة ورق العنب Hinata ودودة اللوز الأمريكية H.armigera ، وأبو دقيق الخبازي V.cardus و التي تم اختيارها بعد رؤية OB في الحشرات المدروسة نتائج ايجابية في البادئ المدروس أظهرت نتائج تقطيع الـ DNA للفيروسات المعزولة من يرقات فراشة الواي الفضية Agamimia ، وأبو دقيق الملفوف P. rapae ، ودودة ورق العنب lineata . ودودة اللوز الأمريكية H.armigera ، وأبو دقيق الخبازي V.cardus وجود حزما مختلفة ضمن هلامة الأغاروز ، وعند استخدام البيانات لرسم شجرة القرابة الوراثية باستخدام برنامج المعلوماتية ( 1.36 ) TREECON وجد أن العينات المدروسة انقسمت إلى مجموعتين المجموعة الأولى الفيروسات المعزولة من يرقات فراشة الواي القضية ( ريف ( دمشق ) ودودة اللوز الأمريكية ( الحسكة ) ، أما المجموعة الثانية تشمل الفيروسات المعزولة من أبو دقيق الخبازي ريف دمشق ) ، ودودة ورق العنب ريف دمشق ) وأبو دقيق الملفوف ( درعا ) تم تقييم فاعلية ثلاث عزلات فيروسية وهذه العزلات هي : 223 من يرقات cardui . المصابة بالفيروس وجمعت من جديدة عرطوز في عام 2011 ، والعزلة 166 من يرقات A gamma cardui المصابة بالفيروس وجمعت من بعض الحقول في دوما في عام 2010 ، والعزلة 7 من يرقات cardu ... المصابة بالفيروس ، وهذه اليرقات جمعت من بعض حقول سعسع في عام 2010 بينت النتائج التفوق للعزلة الفيروسية 166 على العزلة 7 ظاهريا والعزلة 223 معنوياً عند مستوى احتمال 1 كما تم اختبار فاعلية العزلة 166 على يرقات العمر الرابع لدودة الشمع الكبيرة وعلى الأعمار اليرقية الخمسة الأولى لحشرة حفار ساق التفاح ، وبينت النتائج أن حساسية اليرقات للفيروسات نقل كلما كبرت اليرقات في العمر ، وكانت أعلى متوسط للنسبة المئوية لموت العمر البرقي الأول 93.33 % ، وأقلها 6.66 % في العمر اليرقي الخامس مما يؤسس لاستخدام هذه اليرقات في إنتاج الفيروس وبالتالي العمل على استبدال المبيدات التقليدية بهذا الفيروس في مكافحة الحشرات .